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    常見的微生物培養(yǎng)基

    日期:2023-08-25 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:4466 次

    培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。而其中微生物培養(yǎng)基根據微生物的種類和實驗目的不同也有不同的種類和配制方法,下面介紹幾種常見的微生物培養(yǎng)基。

    1、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

    營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基其實就是一種無選擇性的較低營養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基,主要用于細菌菌落計數,也可以用于細菌的傳代和增菌,但一般不用于細菌的鑒定(除非該細菌菌落有比較特殊的形態(tài)特征)。

    營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配方(每升):蛋白胨10g,牛肉膏粉3g,氯化鈉5g,瓊脂15g,最終pH 7.3±0.2。蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源,氯化鈉能維持均衡的滲透壓,瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

    2、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

    胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基又稱為TSA培養(yǎng)基,是一種基本的非選擇性培養(yǎng)基,含有胰酪蛋白胨、大豆胨、氯化鈉和瓊脂成分,主要用作無菌檢驗及一般微生物的培養(yǎng)。在國標中通常用來做醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試。在待測區(qū)域內選取測試點,將TSA平板打開,布置在測試點,在空氣中暴露30min以上不等時間進行采樣,然后培養(yǎng)進行菌落計數,不同的潔凈度等級要求不同的菌落數。

    胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配方(每升):胰蛋白胨(酪蛋白胰酶消化物)15g、大豆蛋白胨(大豆粉木瓜蛋白酶消化物)5g、氯化鈉5g、瓊脂15g,最終pH7.3±0.2。

    3、LB瓊脂培養(yǎng)基
    LB瓊脂培養(yǎng)基為一種實驗室中廣泛使用的普通培養(yǎng)基。主要成分為胰蛋白胨、酵母提取物、瓊脂、氯化鈉。LB培養(yǎng)基通常用來培養(yǎng)基因工程受體菌(大腸桿菌),這類菌通常是經過改造無法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌。培養(yǎng)這類工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,因此LB培養(yǎng)基通常在基因工程、分子生物學中使用比較多。
    LB瓊脂培養(yǎng)基配方(每升):胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化鈉10g,瓊脂15-20g,最終pH 7.4±0.2 。

    4、PDA培養(yǎng)基
    PDA培養(yǎng)基是馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的簡稱,即Potato Dextrose Agar (Medium),分別對應馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂的英文。它屬于固體培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基。PDA培養(yǎng)基有利于微生物生長發(fā)育,并且節(jié)省原料,一般在培養(yǎng)酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面應用廣泛。
    PDA培養(yǎng)基配方(每升):土豆200g,葡萄糖20g,瓊脂15-20g,自然pH。

    5、伊紅美藍培養(yǎng)基

    伊紅美藍培養(yǎng)基通常簡稱EMB medium,為弱選擇性培養(yǎng)基,主要用于大腸桿菌和產氣腸桿菌的分離和鑒別,也適用于大腸菌群的分離培養(yǎng)。

    伊紅美藍培養(yǎng)基配方(每升):蛋白胨10g,乳糖10g,磷酸氫二鉀2g、瓊脂20-30g,2%伊紅水溶液20ml,0.5%美藍水溶液13ml

    其配方中各主要成分的作用為:蛋白胨提供碳源和氮源;乳糖是大腸菌群發(fā)酵的糖類;磷酸氫二鉀是緩沖劑;瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑;伊紅(Eosin Y)也稱曙紅或四澳熒光素,為酸性染料;美蘭(eosin-methylene blue),也叫亞甲藍(C16H18N3S.CI),為堿性染料,二者在培養(yǎng)基中均為指示劑。

    其原理是:當大腸桿菌分解乳糖產酸時,細菌帶正電,所以染上紅色,再與美蘭結合而形成紫黑色菌落,并帶有金屬光澤;產氣腸桿菌則呈棕色,很少有金屬光澤,同時不分解乳糖的細菌,如沙門氏菌和志賀氏菌,則為無色或琥珀色半透明菌落;凝固酶陽性葡萄球菌為無色針尖大小的菌落;白色念珠菌則為蛛絲狀或羽毛狀菌落。

    6、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基

    麥康凱瓊脂培養(yǎng)基簡稱為MAC培養(yǎng)基,具有中等強度選擇性,抑菌能力略強,主要抑制革蘭氏陽性菌,但有少數革蘭氏陰性菌也不生長,用于分離鑒定細菌的培養(yǎng)基。主要成分為蛋白胨、脙胨、豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) 氯化鈉、瓊脂、乳糖、1%結晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液。

    其原理是:膽鹽可以抑制革蘭氏陽性菌的生長,對傷寒等沙門菌的生長有促進作用。中性紅可以把能分解乳糖和不分解乳糖的細菌區(qū)分開,呈現不同顏色。沙門菌及志賀菌呈無色菌落,大腸埃希菌呈桃紅色菌落。

     

     


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